今天晶抗生物為科研朋友介紹ELISA試劑盒實驗檢測樣本處理方法的介紹。
一、血清
對于血清樣本的處理,都是離心取上清液待檢,在做預(yù)實驗過程中,血清樣本稀釋5倍直接進(jìn)行實驗。室溫血液自然凝固10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。
二、血漿
應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇EDTA、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑,混合10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。
三、尿液
用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。胸腹水、腦脊液參照此實行。
四、糞便樣本的處理方法
對于糞便樣本的處理,一般要求采集干的糞便,稀的糞便不利于檢測(對樣本處理帶來難度,也會使準(zhǔn)確性降低)。
糞便樣本處理如下:
① 收集:直接用醫(yī)院臨床收集糞便的耗材進(jìn)行收集;
② 采樣:一般選取的重量不能低于50mg,以1g為基準(zhǔn)。稱取1g加9ml的PBS(磷酸鹽緩沖液,PH控制在7.2-7.4,濃度為0.01mol/L)換算成勻漿的比例就是10%;
③ 保存:勻漿后的樣本如果采樣周期在1周之內(nèi),可以保存在2-8℃,如果取樣周期在一個禮拜以上一個月以內(nèi),-20℃保存。如果取樣周期超過1個月,保存在-80冰箱!低溫保存的話,盡量避免反復(fù)凍融。
五、組織標(biāo)本
切割標(biāo)本后,稱取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆?。?biāo)本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS(PH7.4),或組織蛋白萃取試劑,用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿化。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。分裝后一份待檢測,其余冷凍備用。
植物組織的提取,不管是根莖組織還是葉片組織還是果實組織,都應(yīng)該采用鮮重的計重方式,一般要遵循以下原則:
① 稱取的組織重量不能低于50mg。
② 勻漿的比例按照10%,即1g組織加9ml的勻漿液,勻漿液一般選取PBS(PH=7.2-7.4)
③ 組織在勻漿器勻漿過程中,勻漿液應(yīng)該分2次加進(jìn)去,這樣勻漿更充分。
④ 充分勻漿完成后離心取上清,離心機(jī)的轉(zhuǎn)數(shù)選取2000-3000轉(zhuǎn)每分,轉(zhuǎn)數(shù)不宜超過5000.離心時間為15-30分鐘。
六、細(xì)胞培養(yǎng)上清
檢測分泌性的成份時,用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。
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