大部分elisa 檢測均以血清為標(biāo)本,那么在ELISA試驗(yàn)過程中血清標(biāo)本有哪些留意事項(xiàng)呢?
血清具體留意事項(xiàng):
1、要留意避免呈現(xiàn)嚴(yán)峻溶血。血紅蛋白中含有血紅素基團(tuán),其有類似過氧化物的活性,因此,在以HRP為符號(hào)酶的ELISA測定中,如血清標(biāo)本中血紅蛋白濃度較高,則其就很容易在溫育過程中吸附于固相,然后與后邊參加的HRP底物反響顯色。
2、樣本的收集及血清別離中要留意盡量避免細(xì)菌污染,一則細(xì)菌的成長,其所排泄的一些酶或許會(huì)對(duì)抗原抗體等蛋白發(fā)生分解效果;二則一些細(xì)菌的內(nèi)源性酶如大腸桿菌的β-半乳糖苷酶自身會(huì)對(duì)用相應(yīng)酶作符號(hào)的測定方法發(fā)生非特異性攪擾。
3、血清標(biāo)本如是以無菌操作別離,則能夠在2~8℃下保存一周,如為有菌操作,則主張冰凍保存。樣本的長期保存,應(yīng)在-70℃以下。
4、冰凍保存的血清標(biāo)本須留意避免因停電等形成的反復(fù)凍融。標(biāo)本的反復(fù)凍融所發(fā)生的機(jī)械剪切力將對(duì)標(biāo)本中的蛋白等分子發(fā)生破壞效果,然后引起假陰性成果。此外,凍融標(biāo)本的混勻亦應(yīng)留意,不要進(jìn)行劇烈振蕩,反復(fù)顛倒混勻即可。
5、血清標(biāo)本在保存中如呈現(xiàn)細(xì)菌污染所致的混濁或絮狀物時(shí),應(yīng)離心沉積后取上清檢測。
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