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上海晶抗:關(guān)于原代細(xì)胞的培養(yǎng)方法
更新時(shí)間:2021-02-03   點(diǎn)擊次數(shù):1171次
1、原代細(xì)胞 組織塊培養(yǎng)法 
(1)按照前述方法選材,將組織剪成或切成1mm3巨細(xì)的小塊,并參與少量培養(yǎng)基使組織濕潤(rùn)。 
 
(2)將小塊均勻涂布于瓶壁,每小塊距離0.2 cm~0.5cm,一般在25mL培養(yǎng)瓶(底面積為17.5cm2)可接種20~30小塊為宜,小塊放置后,輕輕翻轉(zhuǎn)培養(yǎng)瓶,使瓶底朝上,然后于瓶?jī)?nèi)參與適量培養(yǎng)基蓋好瓶塞,將瓶?jī)A斜放置在37℃溫箱內(nèi)。 
 
(3)培養(yǎng)2~4小時(shí),待小塊貼附后,將培養(yǎng)瓶緩慢翻轉(zhuǎn)平放,靜置培養(yǎng),動(dòng)作要輕,嚴(yán)禁搖擺和來(lái)回振蕩,以防因?yàn)榧?dòng)而使小塊漂起而形成培養(yǎng)失利,若組織塊不易貼壁可預(yù)先在瓶壁涂一薄層血清、胎汁或鼠尾膠原等。
 
2.消化培養(yǎng)法 
該方法是選用前述的消化松散法,原代細(xì)胞 將阻止細(xì)胞生長(zhǎng)的細(xì)胞間質(zhì)(包含基質(zhì)、纖維等)去除,使細(xì)胞松散形成細(xì)胞懸液,然后分瓶培養(yǎng)。
 
3.懸浮細(xì)胞培養(yǎng)法
關(guān)于懸浮生長(zhǎng)的細(xì)胞,如白血病細(xì)胞、骨髓細(xì)胞、胸水和腹水中的癌細(xì)胞和細(xì)胞無(wú)需消化,可選用低速離心別離,直接培養(yǎng),或經(jīng)細(xì)胞分層液別離后接種培養(yǎng)。 
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