ELISA試劑盒方法被廣泛應(yīng)用于各種抗原和抗體測定,具有靈敏度高,操作簡單等優(yōu)點,但是在具體實驗過程中影響因素較多,并且要按照嚴(yán)格的說明要求,在臨床檢驗中除正常反應(yīng)外,有時??梢姷揭恍╁e誤結(jié)果(即假陽性或假陰性結(jié)果)。且上海晶抗生物所有產(chǎn)品僅用于科研實驗,不用于任何臨床診斷。
影響ELISA測定錯誤結(jié)果的原因主要有:1、標(biāo)本因素;2、試劑因素;3、操作因素。上海晶抗生物就標(biāo)本因素對ELISA測定的影響做如下總結(jié)。
一、類風(fēng)濕因子
人血清中IgM、IgG型類風(fēng)濕因子(RF)可以與ELISA系統(tǒng)中的捕獲抗體及酶標(biāo)記二抗的FC段直接結(jié)合,從而導(dǎo)致假陽性。
解決辦法
1.用F(ab)2替代完整的IgG;
2.標(biāo)本用聯(lián)有熱變性(63℃,10 min)IgG的固相吸附劑處理(將熱變性IgG加入到標(biāo)本稀釋液中同樣有效);
3.檢測抗原時,可以用巰基乙醇等加入到標(biāo)本稀釋液中,使RF降解。
二、補體
ELISA系統(tǒng)中固相一抗和標(biāo)記二抗過程中,抗體分子發(fā)生變構(gòu),其FC段的補體C1q分子結(jié)合位點被暴露出來,使C1q 可以將二者連接起來,從而造成假陽性。
解決辦法
1.用EDTA稀釋標(biāo)本;
2.用53℃,10 min或56℃,30 min加熱血清使C1q滅活。
三、嗜異性抗體
人類血清中含有能與嚙齒類動物(如鼠等)Ig(s) 結(jié)合的天然嗜異性抗體,可將ELISA系統(tǒng)中一抗和二抗連接起來,也能造成假陽性。
解決辦法
可在標(biāo)本稀釋液中加入過量的動物Ig(s),但加入量不足或亞類不同時無效。
四、嗜靶抗原的自身抗體
抗甲狀腺球蛋白、抗胰島素等嗜靶抗原的自身抗體,有時能與靶抗原結(jié)合形成復(fù)合物,在ELISA方法中均可干擾抗原抗體測定結(jié)果。
解決辦法
測定前需用理化方法將其解離后再測定。
標(biāo)本中其它成分也可能會對ELISA試劑盒測定結(jié)果有干擾作用,如血清脂質(zhì)過高、血紅蛋白及血液粘度過大等。所以做實驗前一定要仔細(xì)確認(rèn),上海晶抗生物提供技術(shù)指導(dǎo)服務(wù),如您在實驗中遇到任何自己不明白的問題,都可咨詢我司技術(shù)專員,我們將以的產(chǎn)品和完善的服務(wù)讓您滿意。
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