ELISA試劑盒熒光標(biāo)記是研究細(xì)胞凋亡的zui基本方法。細(xì)胞凋亡的形態(tài)學(xué)變化及生化學(xué)變化都可以通過(guò)熒光標(biāo)記的的方法而檢測(cè)出來(lái),從而區(qū)別鑒別出正常細(xì)胞、凋亡細(xì)胞、壞死細(xì)胞以及不同凋亡時(shí)期或細(xì)胞周期。
碘化丙啶(Propidium Iodide, PI)是一種DNA結(jié)合性染料,其激發(fā)和發(fā)射波長(zhǎng)分別為536nm617nm,產(chǎn)生紅色熒光,但無(wú)膜通透性,不能透過(guò)活細(xì)胞膜,只能染死細(xì)胞。因此,在熒光顯微鏡下觀察,正常細(xì)胞不能著色,早期凋亡細(xì)胞呈微弱紅光,晚期凋亡細(xì)胞紅光加強(qiáng),壞死細(xì)胞呈強(qiáng)紅色熒光。采用流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞周期時(shí),凋亡細(xì)胞因內(nèi)源性核酸酶被激活,使DNA廣泛降解、斷裂,DNA結(jié)構(gòu)發(fā)生劇變,隨著凋亡的進(jìn)程,DNA斷裂產(chǎn)生的小分子量DNA溢出胞外,細(xì)胞總DNA量降低,于正常G0/G1細(xì)胞群前出現(xiàn)一DNA低染細(xì)胞群,即G1峰前出現(xiàn)亞二倍體峰(sub-G1)或稱A0細(xì)胞群,即凋亡細(xì)胞群。
用本ELISA試劑盒的PI直接對(duì)細(xì)胞DNA染色后,進(jìn)行流式細(xì)胞儀分析,即可檢測(cè)到凋亡細(xì)胞DNA的變化。
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