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ELISA試劑盒常用方法的優(yōu)缺大總結
更新時間:2018-03-19   點擊次數(shù):1133次

ELISA是一種廣泛應用在測定液體樣本中的蛋白、抗體、或激素的免疫剖析技能。酶聯(lián)免疫吸附實驗的規(guī)范程序,通常是把蛋白、抗體、或激素等(即抗原)直接或是以捕捉抗體(capture Ab)固定在固相載體上,再參加一級檢測抗體(primarydetection Ab),形成一個抗原抗體的復合物。假如該抗體現(xiàn)已用酶(enzyme)符號了,即可用來直接測定抗原的量,若無,則可使用另一個酶符號的二級抗體來測定抗原的量。測定抗原量的辦法是參加該酶的底質(substrate),作用后發(fā)作呈現(xiàn)的色彩深淺和樣本中的抗原量呈正比的,依此原理計算出樣本中的抗原總量或濃度。

信任經常用elisa試劑盒做實驗的科研朋友都知道,有四種常用的辦法來檢測,分別是直接法、間接法、雙抗體夾心法和競賽法及*新ELISA技能--依據(jù)細胞法。今天上?;饩蛶私馑鼈兊膬?yōu)缺陷!
1.雙抗體夾心法(sandwich ELISA)
被檢測的抗原包被在兩個抗體之間,其間一個抗體將抗原固定于固相載體上,即捕捉抗體。另一個則是檢測抗體,此抗體可用酶符號后直接測定抗原的量;或不符號,再透過酶符號的二級抗體來測定抗原的量。這兩種抗體有必要當心選取,才可防止交互反響或競賽相同的抗原結合部位。
優(yōu)勢:高靈敏、高專一性,抗原無須事前純化。
缺陷:抗原必定得擁有兩個以上的抗體結合部位。
2.競賽法(competitive ELISA)
樣本里的抗原(自在抗原)和純化并固定在固相載體上的抗原(固定抗原)一起競賽相同的抗體,當樣品里的自在抗原越多,就能夠結合越多的抗體,而固定抗原就只能結合到較少的抗體,反之亦然。經清洗過程,洗去自在抗原和抗體的復合物,只留下固定抗原和抗體的復合物,拿來與只要固定抗原的對照組成果相比較,依據(jù)呈色差異就可計算出樣品里的抗原含量。
優(yōu)勢:可適用比較不純的樣本,并且數(shù)據(jù)再現(xiàn)性很高。
缺陷:整體的敏感性和專一性都較差。
3.新ELISA技能--依據(jù)細胞法(cell-based ELISA)
依據(jù)細胞法是一種新的定性蛋白檢測技能,將細胞直接在微孔板里培育,待檢測時,不需抽提蛋白和裂解細胞,便可直接丈量微孔板里蛋白經影響或抑制作用后的改變。
優(yōu)勢:無需裂解細胞,所以方針蛋白丟失*少,可測定完好細胞、黏附細胞、還有非粘附細胞。
缺陷:不能測定抗原量。
4.直接法(direct ELISA)
將抗原直接固定在固相載體上,參加酶符號的一級抗體,即可測定抗原總量,此一級抗體的特異性非常重要。
優(yōu)勢:操作手續(xù)簡短,因無須使用二抗可防止交互反響。
缺陷:實驗中的一抗都得用酶符號,但不是每種抗體都適合做符號,費用相對提高。
5.間接法(indirect ELISA)
此測定辦法與直接法相似,不同在于一級抗體沒有酶符號,改用酶符號的二級抗體去辨識一級抗體來測定抗原量。
優(yōu)勢:二抗能夠加強信號,并且有多種挑選能做不同的測定剖析。不加酶符號的一級抗體則能保存它*多的免疫反響性。
缺陷:交互反響發(fā)作的機率較高。

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